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QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因组扩增试剂
QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因组扩增试剂使用创新的多位移扩增（MDA）技术，从小样品中提供优化的全基因组扩增试剂（WGA）。50μl反应的典型DNA产量高达10μg，平均产物长度大于10kb（范围在2kb和100kb之间）。*的REPLI-g技术可从各种小型或珍贵样品中提供高度均一的WGA，包括纯化的基因组DNA，或直接来自新鲜或干燥的血液，新鲜或冷冻组织和细胞。
红荣微再（上海）生物工程技术有限公司 ：1500 1904 520 Q:239 555 7778
QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因组扩增试剂
用于从小或珍贵样品中进行高度均一的全基因组扩增
- 易于扩增，产量高达10μg
- 基因组基因座的无偏差扩增
- 多位移放大（MDA）带来可靠的结果
- 扩增的DNA非常适合大多数下游应用
- 长期储存期间没有DNA降解的风险
REPLI-g Mini Kit使用创新的多位移扩增（MDA）技术，从小样品中提供优化的全基因组扩增试剂（WGA）。50μl反应的典型DNA产量高达10μg，平均产物长度大于10kb（范围在2kb和100kb之间）。*的REPLI-g技术可从各种小型或珍贵样品中提供高度均一的WGA，包括纯化的基因组DNA，或直接来自新鲜或干燥的血液，口腔拭子，新鲜或冷冻组织和细胞。这种简单可靠的方法能够对基因组进行准确和无偏的扩增，并生成DNA，无需进一步纯化或定量即可应用于不需要标记的下游应用。与基于PCR的WGA技术相比，
性能
来自各种样品的高产量，适用于多种应用
使用REPLI-g Mini Kit，可以使用各种临床和非临床研究样本，包括基因组DNA，新鲜或干燥的血液，新鲜或冷冻组织和细胞。每50μl反应的典型DNA产量始终达到10μg，而无论模板DNA的数量如何，通常都能获得均一的扩增DNA产量。从不同的模板浓度获得均匀的DNA产量始终是重要的，但对于高通量应用尤其重要，这需要随后的遗传分析，而无需额外测量或调整DNA浓度。
REPLI-g扩增DNA的平均产物长度通常大于10kb，范围在2kb和100kb之间，使得能够进行下游应用，例如复杂的限制酶分析和长程PCR。REPLI-g扩增的DNA非常适用于基因分型应用，例如使用TaqMan®引物/探针组进行SNP基因分型，测序和STR /微卫星分析。
成功用于下一代测序
许多出版物已经证明REPLI-g扩增DNA成功应用于下一代测序（NGS）应用，包括从肿瘤细胞的外显子组和全基因组测序，到宏基因组学研究，到单细胞分析（对于一系列近期出版物而言）在NGS中成功使用REPLI-g，请参阅我们的WGA资源页面）。由于使用全基因组扩增的DNA用于NGS和阵列应用已经引起争议，我们检测到可能影响使用扩增DNA用于这些下游应用的成功的潜在因素。我们确定输入材料的质量强烈影响下游NGS实验的成功。如果使用低质量DNA（例如，降解的DNA）或老化的组织材料，所得到的扩增的DNA可能不会给出可靠的结果（数据未显示）。然而，使用REPLI-g技术的WGA在完整细胞或未降解的纯化DNA上显示NGS结果与用纯化的gDNA获得的结果相当。基因组基因座序列的序列覆盖和比对比较表明WGA后的垃圾DNA水平小化，而扩增和基因组DNA的错误率在相似的百分比范围内。
高保真全基因组扩增
REPLI-g技术在整个基因组中提供高度均一的DNA扩增。Phi29聚合酶可复制高达70kb而不与基因组DNA模板解离。与基于PCR的全基因组扩增（WGA）技术相比，Phi29聚合酶具有3'→5'核酸外切酶校正活性，并且在复制期间与Taq DNA聚合酶相比保持高达1000倍的保真度。试剂盒中提供的外切核酸酶抗性引物可确保高产量的DNA产物，WGA缓冲系统针对非常长的阅读长度和无偏的基因座表现进行了优化。
REPLI-g优于基于PCR的WGA方法
传统的基因组DNA扩增方法包括创建EBV转化细胞系的耗时过程，然后使用随机或简并寡核苷酸引发的PCR进行全基因组扩增。此外，如其他供应商通常使用的基于PCR的方法（例如，DOP-PCR和PEP）可以产生非特异性扩增假象并且给出基因座的不*覆盖。在一些情况下，可能产生小于1kb长的DNA，其不能用于许多下游应用中。通常，由于使用低保真酶Taq，产生的DNA具有高得多的突变率DNA聚合酶，可导致容易出错的扩增，导致例如单碱基对突变，STR收缩和扩增。与这些缺点相反，REPLI-g在整个基因组中提供高度均一的扩增，在扩增过程中具有小的基因座偏差和小的突变率（参见“ 使用REPLI-g技术的高度代表性扩增 ”和“ *且准确的全基因组扩增 ”） ）。
原理
*的REPLI-g技术使用创新的高保真酶Phi 29聚合酶，使用多重置换扩增（MDA）和温和的碱性变性步骤扩增复杂的基因组DNA，以均匀地扩增基因组位点。REPLI-g Mini Kit的典型产量高达10μg，可以根据您的需要使用REPLI-g Midi Kit轻松按比例缩小，因为两种试剂盒都基于相同的方案并使用相同的反应体积。简单的反应设置和约15分钟的极低处理时间使得REPLI-g成为一种简单可靠的方法，当需要有限或珍贵样品的完整和无偏的轨迹表示时。
放大原理
REPLI-g使用等温基因组扩增，称为多位移扩增（MDA），其涉及随机六聚体与变性DNA的结合，然后使用酶Phi29聚合酶在恒定温度下进行链置换合成。在用作模板的每个置换链上发生另外的引发事件，使得能够产生高产量的扩增DNA。Phi 29聚合酶是一种噬菌体衍生酶，是一种具有3'→5'主要核酸外切酶活性（校对活性）的DNA聚合酶，与Taq相比，其保真度高达1000倍。DNA聚合酶。在*，优化的REPLI-g缓冲系统的支持下，Phi 29聚合酶可轻松解决二级结构，如发夹环，从而防止聚合酶在扩增过程中滑脱，停止和解离。这使得能够产生高达100kb的DNA片段而没有序列偏。
DNA的碱性变性
基因组DNA在用于酶扩增程序之前必须变性，这通常使用苛刻的方法完成，例如在升高的温度下孵育（加热孵育）或增加的pH（化学碱性孵育）。REPLI-g Midi Kit使用温和的碱性孵育，允许均匀的DNA变性，DNA碎片非常低或产生无碱基位点。这导致扩增的DNA具有非常高的完整性，并使扩增片段的长度大化，从而均匀地表示基因组基因座和序列。使用REPLI-g Mini Kit，可确保在后续下游应用中获得可靠的结果，而不会出现假阳性或阴性数据，这与其他使用热诱导变性的WGA技术不同，后者会损害模板DNA，从而导致偏向和代表性不足的位点
程序
简单，一管程序
REPLI-g Mini Kit使用简单可靠的方法从少量分离的靶基因组DNA或直接从全血，干血卡，血沉棕黄层和组织培养细胞中获得准确的基因组扩增。加入裂解缓冲液，裂解样品材料并使DNA变性，然后进行短时间的孵育。中和后，加入预混合物（包括REPLI-g Mini DNA聚合酶），等温扩增反应在30℃下进行过夜。REPLI-g扩增的DNA可以在-20°C下长期保存，没有负面影响。
应用
REPLI-g扩增基因组可用于多种下游应用，包括：
- 使用TaqMan®引物/探针组进行SNP基因分型
- 基于qPCR和PCR的突变检测
- 新一代测序
- STR /微卫星分析
- 桑格测序
- RFLP和Southern印迹分析
- 阵列技术，如比较基因组杂交
QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因组扩增试剂
QIAGEN REPLI-g Mini Kit产品订购信息
品牌 产品货号 产品名称
QIAGEN 150023 REPLI-g Mini Kit （25）
QIAGEN 150025 REPLI-g Mini Kit （100）
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