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两天完成泛癌基因组体细胞突变靶向重测序扩增子建库
TruSeq Amplicon - Cancer Panel
英文名称:TruSeq® Amplicon - Cancer Panel,缩写TSACP
中文名称:TruSeq 扩增子法癌症Panel
用途:癌症基因组体细胞突变扩增子建库试剂盒,适用于FFPE样本。
TruSeq Amplicon - Cancer Panel 提供预先设计的、优化的寡核苷酸探针,富集212个扩增子来检测48个癌症相关基因中的突变区域。
TruSeq Amplicon - Cancer Panel能够对包括BRAF,KRAS和EGFR在内的重要癌症相关基因进行高度敏感的突变分析。这些基因突变与许多癌症有关,包括黑色素瘤,结直肠癌,卵巢癌和肺癌。这种检测方法从珍贵的FFPE样品筛选这些重要变异的*能力将从多种肿瘤中解开大量基因组信息。
The TruSeq Amplicon - Cancer Panel enables highly sensitive mutation detection studies of important cancer-related genes, including BRAF, KRAS, and EGFR. Mutations in these genes are linked to many cancers, including melanoma, colorectal, ovarian, and lung cancer.
TSACP特点
提供预先设计的,优化的寡核苷酸探针,用于测序> 35千碱基(kb)的靶基因组序列中的突变热点。
在高度多重的单管反应中,用212个扩增子靶向48个基因。
对来自选定基因(如BRAF,KRAS和EGFR)的数百个癌症热点进行测序。
两天内完成基因组DNA的全面分析数据。
zui准确的数据能够可靠地检测低于5%的突变频率。
使用简单的仪器上自动分析软件对所有样品进行变异调用和分析。
TSACP应用
泛癌分析:快速高效地发现、验证和筛选癌症相关遗传变异。
TSACP参数
分析时间 8 hours
手动操作 3.5 hours
加样量 150 ng high-quality genomic DNA, 250 ng FFPE genomic DNA
测序仪 MiniSeq, MiSeq, MiSeqDx in Research Mode
核酸 DNA
特别样本 FFPE Tissue 福尔马林固定包埋组织
突变类型Insertions-Deletions (indels), Somatic Variants
种属 人
癌症类型 Pan-Cancer 泛癌
方法 扩增子测序 靶向基因测序Amplicon Sequencing, Targeted DNA Sequencing
TSACP适用样本
高质量基因组DNA:250ng(推荐),150ng(zui低)
FFPE基因组DNA:250ng (zui低)
简化的操作流程
TSACP将一些操作流程简化,包括FFPE样品的DNA质量控制分析,简单磁珠样品标准化,自动化簇生成和双端测序以及仪器上的数据分析。利用MiSeq系统的长双端读取能力,速度和高数据质量,现在可以在几天内完成整个项目,而不是几个月。
样本质控—样本目标基因的扩增子获得—扩增子测序和分析
扩增子获得流程:
一对寡核苷酸用来获得一个扩增子。将这些寡核苷酸杂交至未片段化的基因组DNA(96孔板),随后进行延伸和连接以形成DNA模板(带引物序列的目标区域)。使用随试剂盒提供的索引接头,文库被索引,PCR扩增,然后在测序之前pool到单个试管中。
A癌症panel寡核苷酸探针的杂交
B延伸和连接
C通过PCR添加索引(indexes)和测序接头
D收获准备测序的扩增子
TSACP性能规格
Panel 大小35 kb;内容 212 amplicons;扩增子大小 170–190 bp;DNA Input 250 ng
Assay Time < 7 hrs, 2.5 hrs hands-on;Enrichment Specificity > 85%;Coverage Uniformity > 85% at 0.2× mean
Dropouts* 0 (Dropouts are defined as amplicons having no sequencing coverage when the sample achieves a mean sequencing depth of > 1000×.)
TSACP目标基因列表
ABL1 | EGFR | GNAS | MLH1 | RET |
AKT1 | ERBB2 | HNF1A | MPL | SMAD4 |
ALK | ERBB4 | HRAS | NOTCH1 | SMARCB1 |
APC | FBXW7 | IDH1 | NPM1 | SMO |
ATM | FGFR1 | JAK2 | NRAS | SRC |
BRAF | FGFR2 | JAK3 | PDGFRA | STK11 |
CDH1 | FGFR3 | KDR | PIK3CA | TP53 |
CDKN2A | FLT3 | KIT | PTEN | VHL |
CSF1R | GNA11 | KRAS | PTPN11 |
|
CTNNB1 | GNAQ | MET | RB1 |
|
名词解释:Pan-Cancer(泛癌)
基因组图谱泛癌计划:由于起源部位、细胞类型、基因突变形式的不同,肿瘤可表现出不同的形态。这些因素同时影响肿瘤的治疗效果。虽然已经证实许多基因的改变直接导致了表型的改变,然而,许多肿瘤谱系中复杂分子机制依然未*阐明。因此,肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)研究网络分析了大量人类肿瘤,以期发现DNA、RNA、蛋白质和表观遗传学水平的分子改变。含丰富数据的结果给我们提供了一个机会,对整个肿瘤谱系的共性、个性及新观点形成一个整体描绘。基因组图谱泛癌计划zui先比较了12种肿瘤类型。对不同肿瘤分子改变及其功能的分析,未来会告诉我们如何将有效的治疗方法应用于类似基因表型的肿瘤。
TruSeq Amplicon - Cancer Panel Kit 组件 (FC-130-1008):
四个试剂盒包括两个Pre-Amplification、一个Post-Amplification和一个TruSeq Amplicon - Cancer Panel Oligo Kit, Pre-Amplification试剂盒。
TSACP订购信息
品牌 | 货号 | 产品描述 | 规格 |
Illumina | FC-130-1008 | TruSeq Amplicon - Cancer Panel | 96 样本 |
TSACP搭配试剂:
Illumina FFPE QC Kit WG-321-1001
TruSeq Custom Amplicon Index Kit (96 indices, 384 Samples) FC-130-1003
MiSeq Reagent Kit (300-cycles - PE) MS-102-2002
可选: TruSeq Index Plate Fixture and Collar Kit (2 Each) FC-130-1007
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