人iPS细胞CRISPR/Cas9基因编辑和单细胞克隆

• 型   号：Cellartis Y30021
• 价   格：7696

人iPS细胞CRISPR/Cas9基因编辑和单细胞克隆产品包括三个完整试剂盒。包括两种基因编辑方法和单细胞克隆培养基。可以选择使用电穿孔技术或纳米囊泡（gesicles）技术进行CRISPR/Cas9的基因编辑。用于CRISPR / Cas9介导的hiPSC（人诱导多能干细胞）基因编辑，hiPSC的单细胞克隆和疾病建模。

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产品图片仅供参考。实际产品为三个套装。

从开始到结束

人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统

产品英文名称：hiPSC Editing and Single-Cell-Cloning Systems

产品中文名称：人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统

产品包括三个完整系统（试剂盒）。包括两种基因编辑方法和单细胞克隆培养基。可以选择使用电穿孔技术或纳米囊泡（gesicles）技术进行CRISPR/Cas9的基因编辑。

单细胞克隆培养基系统：基础培养基+包被剂+添加剂

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)

基因编辑系统（均包含上述培养基）

Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643)

Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一个完整的，在无饲养层和成分确定条件下，用于hiPSCs有效扩增和扩大生产的系统。试剂盒包含了从接种单细胞至96孔板到扩增至48孔板过程中所有必要的试剂。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。

Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一个完整的系统，允许通过电穿孔的方法对hiPSCs进行有效的基因编辑以及随后的单细胞克隆形成和扩增至48孔板。该系统中提供了重组Cas9蛋白质，以及产生大量sgRNAs所有必要的试剂，用于电穿孔hiPSCs。系统中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 组份，用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。

Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一个完整的系统，允许通过gesicle导入Cas9/sgRNA复合物进行有效的基因编辑随后的单细胞克隆形成和扩增至48孔板。Gesicles是一种无毒的、高效的、替代电穿孔的方法，不依赖昂贵的设备或耗材。系统中提供所有的必要试剂用于产生细胞衍生的纳米囊泡（称做gesicles），来转导Cas9和sgRNA至hiPSCs。系统中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）组份，用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。

产品特点

☆高效率的hiPSC基因编辑— 使用电穿孔技术或纳米囊泡（gesicles）技术传递Cas9蛋白和sgRNA，无需基因组整合并减少脱靶效应

☆单细胞存活率—当单细胞接种在96孔板中时编辑后hiPSC表现出高（通常约50％）存活

☆基因编辑后和单细胞克隆过程中维持多能性 - hiPSC维持高水平（> 90％）的多能性标记物Oct-4，TRA-1-60和SSEA-4

☆从头到尾保持稳定的核型 —在基因编辑，单细胞克隆和扩增期间保持正常和稳定的核型

☆基因编辑实验方法灵活—完整试剂盒包括两种编辑方式和不止一种单细胞克隆方式

☆在整个基因编辑/单细胞克隆过程中连续使用DEF-CS技术— 基因编辑前后使用Cellartis DEF-CS 500培养系统（货号Y30010），单细胞克隆实验后使用同一培养系统进行放大培养

Highly efficient gene editing in hiPSCs—use either electroporation or gesicles to deliver Cas9 protein and sgRNA with no genomic integration and reduced off-target effects

Superior single-cell survival—edited hiPSCs exhibit high (typically ~50%) survival when seeded as single cells in a 96-well plate

Maintenance of pluripotency after editing and during single-cell cloning—hiPSCs maintain high levels (>90%) of pluripotency markers Oct-4, TRA-1-60, and SSEA-4

Stable karyotype from start to finish—maintain a normal and stable karyotype throughout editing, single-cell cloning, and expansion

Flexibility to perform gene editing experiments your way—choose from complete kits that provide editing and single-cell cloning solutions using either electroporation-based (Code No. 632643) or gesicle-based (Code No. 632642) CRISPR/Cas9 techniques, or utilize the culture media kit (Code No. Y30021) to perform efficient single-cell cloning following your own editing experiments

Continuous use of DEF-CS technology throughout gene editing/single-cell cloning experiments—use the Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010) before and during gene editing experiments, then during scale-up after single-cell cloning experiments

1500 1904 520 红荣微再-客服: 经销商专员

产品应用

CRISPR / Cas9介导的hiPSC基因编辑

hiPSC的单细胞克隆

疾病建模

产品组成 

单细胞克隆培养基

Y30021 Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit 1 Kit

基因编辑系统（保护单细胞克隆培养基）

632643 Cellartis® iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System 1 Kit

632642 Cellartis® iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System 1 Kit

Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit 

（Code No. Y30021，1 kit）

iPS单细胞克隆培养基：基础培养基+包被剂+添加剂

· Cellartis DEF-CS 500 Basal Medium (Code No. Y30011; 500 ml)

· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS COAT-1 (Code No. Y30018; 2 × 800 μl)

· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Additives (Code No. Y30019; 2 × 750 μl, 1 × 500 μl, 1 × 500 μl)

Cellartis® iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System

(Code No. 632643; 1 system)

iPS细胞 rCas9电穿孔和单细胞克隆系统：sgRNA+Cas9+iPS单细胞克隆培养基

· Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 1 kit)

· Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (Code No. 632641; 100 μg)

· Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit (Code No. Y30021; 1 kit）

Cellartis® iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System

（Code No. 632642；1 system）

iPS细胞CRISPR/Cas9纳米囊泡和单细胞克隆系统：纳米囊泡+iPS单细胞克隆培养基

· Guide-it™ CRISPR/Cas9 Gesicle Production System (Code No. 632613；1 kit)

· Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit (Code No. Y30021;1 kit）

基因编辑后iPS细胞的多能干性：表达多能细胞表面标记物的细胞比率

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) growing in DEF-CS medium were edited with Cas9 and sgRNA specific to CD81. Pluripotency is maintained in edited human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that have been seeded as single cells. 12 clonal lines created from single-seeded hiPSCs exhibit high levels of Oct-4 (97-99%), TRA-1-60 (98-99%), and SSEA-4 (98-99%).

参考文献

Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90-104 (2016).

Jinek, M. et al. A Programmable Dual-RNA-Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science 337, (2012).

Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012-9 (2014).

Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347-55 (2014).

背景介绍

人诱导多能干细胞的基因编辑

人诱导多能干细胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一个功能强大的研究工具和疾病模型，因为其具备增殖、自我更新、分化为多种细胞类型的能力。此外，人iPS细胞还可以再现细胞来源个体的疾病表型和基因型。将人iPS细胞结合基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术，可以在同基因的细胞系中研究特定基因改变引起的功能影响，因为基因编辑过的人iPS细胞能提供可再生的、无遗传变异的患病细胞和健康细胞资源。

CRISPR/Cas9系统已经成为一个强大的基因编辑工具，因为其高的靶向特异性，编辑效率和易用性。该技术的强大主要源于它的简单，因为全部只需要一个Cas9核酸酶结合一个单链向导RNA（single guide RNA，sgRNA) 就可以决定靶向特异性（Jinek et al. 2012)。这种RNA编程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端连接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修复途径的易错特性，进而产生基因敲除(通过插入/删除)。这种方法也可以通过同源重组（homology-directed repair，HDR)途径被用于基因敲入。

CRISPR/Cas9系统的组件可以通过多种方法成功导入至靶细胞，包括基于载体的表达系统，RNA转染, 导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)复合物(Sander and Joung 2014)等。与基于载体的方法相比，直接导入Cas9/sgRNA RNPs提供了一种快速转入基因编辑实验的方法，同时脱靶效应的可能性更小（Kim et al. 2014)。

一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入，为了分离和筛选感兴趣的基因型，单细胞必须被分离并扩增为克隆细胞系。传统上,从基因编辑的hiPS细胞建立一个克隆群是低效的、具有挑战性的和耗时的，因为hiPS 细胞是以集落生长和传代的。通常，这会导致细胞死亡和提前分化。然而，Cellartis基因编辑和单细胞克隆系统包含一个成分确定的培养系统(由基础培养基，包被剂，和添加剂组成)，用于有效形成单细胞克隆和扩增基因编辑后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一个基于单层培养的系统，规避了集落状培养带来的挑战，允许单细胞传代和促进接种的单细胞存活和后续扩增。

华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司主营细胞治疗和精准医疗等产品，2018年与TAKARA继续合作，授权代理（上海）其旗下Cellartis干细胞研究制品和Rubicon单细胞文库构建试剂。Cellartis公司位于瑞典，拥有iPS细胞等干细胞分化为肝细胞及脏器细胞的分化诱导技术和ES细胞，ips细胞，分化细胞等干细胞相关产品。

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