了解一下无血清细胞冻存液的操作步骤及注意事项吧
更新时间：2023-02-07 点击次数：1224次
无血清细胞冻存液通用于各种动物细胞株(肿瘤细胞和常规细胞)，冻存细胞可在-80℃长期保存。配方成分明确，不含动物来源性蛋白，不含血清，可减少各类细菌、病毒和支原体等污染，保证冻存细胞的安全。
该冻存液含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分，提高细胞存活率和活力，亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。
下面让我们来了解一下无血清细胞冻存液的操作步骤及注意事项吧。
操作步骤：
1.常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。
2.根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
3.将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000rmp，5分钟离心收集培养细胞沉淀，弃去离心管中的上清液。
4.加入适量的细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为5×105-1×107/ml。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。
5.将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管1ml或1.5ml。
6.直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。
7.如果想液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天时间，方可移至液氮罐中保存。
冻存细胞复苏步骤：
1.从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。
2.待冻存管中细胞混合液融化后，立即加入1ml细胞培养基于冷冻管中与细胞混合，将其中的混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中，1000rmp，5分钟离心收集冻存细胞沉淀，移去上清液(操作时小心，切勿将细胞沉淀移去)。
3.加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓加入到细胞沉淀，轻柔地混匀，将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。
4.镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。
注意事项：
1.冻存细胞分装后，应减少在外存放时间，尽快移入到-80℃超低温冰箱。
2.对于干细胞(ES细胞)、原代细胞等冻存时，我们建议用户在使用前，事先对所冻存的胞进行至少为期1周的该产品试验性细胞冷冻保存培养，确认性能后再进行正式冻存。
3.本品含有10%DMSO，部分对DMSO敏感的细胞，建议对其进行至少1周的本产品试验性的细胞冻存培养，确认性能后再正式冻存。
4.对于没有保种的新的细胞类型，我们建议同时用含有血清的冻存液同时冻存，确保细胞冻存不出现意外全部死亡等现象发生。
5.细胞冻存液经过严格的内毒素、渗透压、病原体和pH检验，确保产品不含病菌、病毒以及支原体等。用于常规的细胞冻存，-80℃可长期保存，细胞存活率在90-98%。
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