教你如何使用硅藻土纯化牛血清白蛋白
更新时间：2022-04-24 点击次数：1578次
用硅藻土纯化牛血清白蛋白(去除牛血清白蛋白中的核酸酶)时，使用的悬浮液为Tris-HCl缓冲溶液，浓度为50mM，pH为7.8;使用的透析液为Tris-HCl缓冲溶液，浓度为10mM，pH为8.0;硅藻土以及悬浮液使用前在121℃条件下灭菌30min。具体的纯化步骤为：
(1)将6g硅藻土用60mL悬浮液(硅藻土与悬浮液的比例为1:10w/v)混合，置于100℃沸水浴中5min，室温条件下搅拌5min，5000rpm离心10min，丢弃上清液;重复上述洗涤步骤3次后，将洗涤后的硅藻土在60mL悬浮液中分散均匀，得到吸附剂分散液，在4℃条件下储存备用;
(2)将2.5g牛血清白蛋白在12.5mL悬浮液中(牛血清白蛋白与悬浮液的比例为1:5w/v)溶解分散均匀，加入18.75mL吸附剂分散液，在4℃搅拌30min后，在该温度下10000rpm离心10min，收集上清;
(3)在上清液中加入18.75mL吸附剂分散液(牛血清白蛋白悬浮液与吸附剂分散液的比例为1:1.5v/v)，在4℃搅拌30min，在该温度10000rpm离心10min，收集上清液;再重复一次;
(4)收集的上清用0.45μm膜过滤后，即得牛血清白蛋白纯化液;
(5)采用分子截留量为10KD的超滤浓缩管2500rpm离心20min，对蛋白浓度进行超滤浓缩，得到超滤牛血清白蛋白样品;
(6)将超滤牛血清白蛋白样品采用分子截留量为14000Da的透析袋4℃条件下搅拌透析2h后，更换透析液透析过夜，超滤牛血清白蛋白样品与透析液的体积比为1:15;
(7)透析后的样品测定蛋白浓度后，稀释至10mg/ml，分装成1mL/支，保存于-20℃。
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