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你知道凝胶电泳的分类有哪些么
更新时间:2019-09-05   点击次数:2573次
   你知道凝胶电泳的分类有哪些么

  1、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳

  琼脂糖(Agarose)是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA段的制备电泳。

  聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式:一是用于分离和纯化双链DNA段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离DNA的缺点是DNA的迁移率受碱基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常,故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。二是用于分离及纯化单链DNA段的变性聚丙烯酰胺凝胶。这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂(尿素或甲酰胺)的存在下聚合而成,变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎*无关,故可用于分离及纯化单链DNA段和DNA测序等。

  2、脉冲电场凝胶电泳

  普通的凝胶电泳技术显然是无法分离如此超大分子量的DNA分子的。

  1984年,D.C.Schwartz和C.R.Cantor发明的脉冲电场凝胶电泳(Pulsed-FieldGelElectrophoresis,PFGE)技术,可以成功地用来分离整条染色体这样的超大分子量的DNA分子。在常规的琼脂糖凝胶电泳中,超过一定大小范围的所有的双链DNA分子,都是按相同的速率迁移的。这是因为它们在单向恒定电场的作用下,仅以"一端向前"的方式游动穿过整个胶板。而在脉冲电场中,DNA分子的迁移方向是随着所用的电场方向的周期性变化而不断改变的。

  在标准的PFGE中,头一个脉冲的电场方向与核酸移动方向成45°夹角,而下一个脉冲的电场方向与核酸移动方向在另一侧亦成45°夹角。由于加压在琼脂糖凝胶上的电场方向、电流大小及作用时间都在交替地变换着,这就使得DNA分子能够随时地调整其游动方向,以适应凝胶孔隙的无规则变化。与分子量较小的DNA分子相比,分子量较大的DNA分子需要更多的次数来更换其构型和方位,以使其可以按新的方向游动。因此,在琼脂糖介质中的迁移速率也就显得更慢一些,从而达到分离超大分子量DNA分子的目的。应用脉冲电场凝胶电泳技术,可成功地分离到分子量高达10bp的DNA大分子。

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