间充质干细胞无血清培养基的使用方法详细说明

　　目前，血清仍是动物细胞培养中基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从10%减少到5%，3%，1%，直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。

　　为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞:

　　1.处于对数生长中期

　　2.>90% 活细胞率

　　3.适应时以较高的起始细胞接种

　　细胞适应无血清培养基的方法

　　1.直接适应--细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中。

　　一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×10~3.5×10细胞/ml。当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×10~4×10细胞/ml时，细胞*适应了无血清培养基。每隔3~5天，当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml，细胞活率在90%时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。

　　2.连续适应--分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。

　　(1)以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基:25%SFM 混合培养基中，传代培养。

　　(2)当细胞密度>5×10细胞/ml时，以2×10到3×10细胞/ml细胞密度，在有血清培养基:SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。

　　(3)以2×10到3×10细胞/ml细胞密度，25%有血清培养基和75% SFM中传代培养。

　　(4)当细胞密度达到1×10到3×10细胞/ml(接种后4到6天)，在100%SFM培养基中传代培养。

　　(5)每隔3到5天，当细胞密度达到1×10到3×10细胞/ml，细胞活率在90%时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。

　　建议备份前一次混合培养的培养物，直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。

　　在适应过程中，不要让细胞生长过度。这将增加选择亚群的可能性。需要注意，与有血清培养基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白质，因而更易于受外界因素的影响。