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淋巴细胞分离液
更新时间:2015-12-24   点击次数:2654次
分离目的  
方便在人体外对机体各种免疫细胞分别作鉴定,计数或功能测定。  淋巴细胞分离以后可以做淋巴细胞抗原片制备,E花环试验,淋巴细胞转化试验,淋巴细胞培养(需无菌操作)    【分离原理】    人 淋巴细胞的方便来源是外周血,分离的原则是收率较高,纯度较好,失活较低,根据不同试验有相对纯度,无论采用哪种方法,应尽zui大可能保持细胞应有活性。分 离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计,根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。此次实验采用的1就是密度梯度离心法。其原理是:人外周血中各种细胞的密度不同,人红细胞密度为1.093,粒细胞为1.092,淋巴细胞为1.074±0.001。密度梯度离心法的原理主要根据各类血细胞比重的差异,利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心,使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带,从而达到分离的目的。      
材料
1、肝素抗凝管,普通管(负压),采血针,血清收集管 2、淋巴细胞分离液(比重1.077 – 1.080 g/mL)。 3、无Ca++、Mg++、Hank's 液  4、刻度吸管、毛细吸管、离心管、离心机等。  5置于冰箱的冷丙酮(固定细胞,保持细胞的完整性)   
方法
1.采静脉血2ml加入肝素抗凝管(或枸橼酸钠),3ml加入普通管。  2.普通管斜面放置30MIN,此时可分离淋巴细胞。用竹签将血块轻轻剥离管壁(主张用玻璃棒),2000rPm离心20分钟,用毛细吸管吸取上清(血清)于血清收集管中,于4℃冰箱保存备用,用于以后的ELISA实验,对流免疫电泳实验和伤寒试管凝集实验,溶血反应,免疫比浊测定补体C3或C4等等。(剥离时也可用毛细吸管轻轻剥离) 

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