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转染效率低?这份细胞转染攻略,快收藏了吧!
更新时间:2024-01-29   点击次数:421次


从导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短,可将转染分为瞬时转染和稳定转染。

瞬时转染(transient transfection):指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内,该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上。瞬时转染的基因表达是快速且短暂的,通常只能维持几天。这种转染方式主要用于快速检测基因功能或蛋白质表达,例如了解基因沉默、抑制性RNA和小规模蛋白质生产等。

稳定转染(Stable transfected):将外源DNA整合到宿主细胞的基因组中,这种整合过程需要更长时间和更复杂的操作。稳定转染后的基因表达是长期且稳定的,因为外源基因会被传递给子代细胞。这种转染方式主要用于长期表达目标基因的实验,例如生产重组蛋白、进行基因敲除或敲入等研究。稳定转染也用于药物筛选、研究形态变化、抗生素耐药性等领域。

细胞转染通常可分为三类途径分别为物理介导、化学介导和生物介导。

物理介导:电穿孔法、显微注射和基因枪等

化学介导:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法和多种阳离子物质介导技术等

生物介导:病毒介导,逆转录病毒、腺病毒等


怎么选择转染试剂:

小编对这三个途径的常用方法进行了总结,记得给小编点个收藏hahaha~


物理介导——电穿孔法

原理:电流能够击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内。

优点:原理简单;不需要载体。

缺点:需要特殊设备,电流对细胞伤害非常大。


化学介导——脂质体转染

原理:阳离子脂质体表面带正电荷,与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子进行包裹,形成DNA脂复合物,能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过细胞内吞进入细胞。

优点:操作比较简单,转染效率高。

缺点:需要进行条件优化;有些细胞体系不易转染;对血清敏感;价格较高。


化学介导——阳离子聚合物

原理:与脂质体转染原理相似,都是利用阳离子与核酸结合成复合物,利用细胞内吞进入细胞内。

优点:在血清内稳定;对细胞毒性相对较低;转染率高;性价比高。

缺点:需要对体系进行条件优化;有些细胞体系不易转染。


生物介导——病毒感染

原理:通过侵染宿主细胞从而将外源基因导入到细胞中。

优点:高转染率;适用性广。

缺点:需要对体系进行条件优化;需要构建病毒载体,步骤较为复杂。


然而,一种方法不会适用于所有的细胞和实验,理想的转染方法应该根据自己的细胞类型和实验需求来选择。合适的细胞转染方法应具有高转染效率低细胞毒性对正常生理学的影响最小,且易于使用可重复性等特点。


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