从导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短,可将转染分为瞬时转染和稳定转染。
瞬时转染(transient transfection):指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内,该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上。瞬时转染的基因表达是快速且短暂的,通常只能维持几天。这种转染方式主要用于快速检测基因功能或蛋白质表达,例如了解基因沉默、抑制性RNA和小规模蛋白质生产等。
稳定转染(Stable transfected):将外源DNA整合到宿主细胞的基因组中,这种整合过程需要更长时间和更复杂的操作。稳定转染后的基因表达是长期且稳定的,因为外源基因会被传递给子代细胞。这种转染方式主要用于长期表达目标基因的实验,例如生产重组蛋白、进行基因敲除或敲入等研究。稳定转染也用于药物筛选、研究形态变化、抗生素耐药性等领域。
细胞转染通常可分为三类途径分别为物理介导、化学介导和生物介导。
物理介导:电穿孔法、显微注射和基因枪等
化学介导:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法和多种阳离子物质介导技术等
生物介导:病毒介导,逆转录病毒、腺病毒等
怎么选择转染试剂:
小编对这三个途径的常用方法进行了总结,记得给小编点个收藏hahaha~
物理介导——电穿孔法
原理:电流能够击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内。
优点:原理简单;不需要载体。
缺点:需要特殊设备,电流对细胞伤害非常大。
化学介导——脂质体转染
原理:阳离子脂质体表面带正电荷,与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子进行包裹,形成DNA脂复合物,能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过细胞内吞进入细胞。
优点:操作比较简单,转染效率高。
缺点:需要进行条件优化;有些细胞体系不易转染;对血清敏感;价格较高。
化学介导——阳离子聚合物
原理:与脂质体转染原理相似,都是利用阳离子与核酸结合成复合物,利用细胞内吞进入细胞内。
优点:在血清内稳定;对细胞毒性相对较低;转染率高;性价比高。
缺点:需要对体系进行条件优化;有些细胞体系不易转染。
生物介导——病毒感染
原理:通过侵染宿主细胞从而将外源基因导入到细胞中。
优点:高转染率;适用性广。
缺点:需要对体系进行条件优化;需要构建病毒载体,步骤较为复杂。
然而,一种方法不会适用于所有的细胞和实验,理想的转染方法应该根据自己的细胞类型和实验需求来选择。合适的细胞转染方法应具有高转染效率,低细胞毒性和对正常生理学的影响最小,且易于使用和可重复性等特点。