冻存管该如何进行冷冻呢？看看本篇吧
更新时间：2022-08-17 点击次数：805次
冻存管又称菌种保存管、磁珠保存管、磁珠冻存管。微生物实验室常用的菌种保存方法有牛奶法、甘油法、斜面法等。复杂程度各异，效果也差别很大。
冻存管的使用是一门学问，并不是打开液氮罐、放入冻存管、关上液氮罐这样简单的三部曲可以完成的。科学正确地使用冻存管，可以避免样本的损失，并保护试验人员的安全。
下面让我们一起来了解一下冻存管的冷冻步骤吧
用预热的PBS溶液洗涤细胞，吸取溶液，含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆盖细胞(薄薄的液层足够，胰蛋白酶和EDTA的浓度需要根据细胞系确定)。
37℃孵育细胞3-5分钟。
细胞从底部脱离之后，终止孵育，加入含有血清的培养基，用移液器轻轻地悬浮细胞。
离心细胞悬液(500xg,5分钟)，用含有血清的培养基重新悬浮。
细胞计数。
离心细胞悬液(500xg,5分钟)，去除上清液，用适量体积的含有血清的培养基重新悬浮细胞。
以1:1体积比混合细胞和冻存液(60%培养基，20%胎牛血清，20%DMSO)，然后转移到Cryo.sTM冻存管中。冻存的细胞密度为1-5×106个/毫升。
含有细胞的Cryo.sTM冻存管建议以−1K/min的速率降温，可以将冻存管置于−70℃含有异丙醇的容器中。如果Cryo.sTM冻存管存储其他样品，可以直接放置在−20℃，−70℃或者液氮的气相。
为了确保样品冷冻均匀，4mL和5mL的Cryo.sTM冻存管需要先置于在−20℃冰箱过夜，然后再转移到−70℃或者液氮的气相。
然后转移Cryo.sTM冻存管到液氮罐。为了避免污染(如支原体)和安全考虑，请将Cryo.sTM冻存管置于液氮的气相，切勿置于液相。
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