了解一下牛血清白蛋白的提取方法吧
更新时间：2022-04-20 点击次数：4492次
牛血清白蛋白BSA大概是生化实验室最为常见、应用最为广泛的蛋白质了。虽然小小的BSA并不那么起眼，但是在生化实验当中，却常常扮演十分关键的角色。
BSA前体蛋白全长607个氨基酸。前体蛋白从N端脱去18个信号肽，以及6个前肽，形成含有583个氨基酸、分子量约为66.5kDa的成熟BSA蛋白。
牛血清白蛋白提取方法，包括以下步骤：
1.血液分离
取新鲜的牛血液6000毫升，加入667毫升38%的柠檬酸三钠，使柠檬酸三钠在牛血液中的终重量浓度为3.8%，然后通过血球分离机(GFX-105血液分离机、辽阳翔隆制药机械有限公司)，对牛血液进行分离(转速16300rpm/min)，分离得到血细胞和血浆。
2.蛋白沉淀溶解
2.1取步骤1中的血浆4000毫升，加入6000毫升的饱和硫酸铵，使硫酸铵在血浆中的终浓度为60%，并搅拌1h，使血浆中的蛋白质沉淀，去除上清液，保留蛋白沉淀。
2.2按与蛋白沉淀的质量比为5:1的比例加入超纯水6000毫升，溶解上述蛋白沉淀，得到蛋白溶解液7000毫升。
3.第一次浓缩换液
通过超滤机对步骤2.2中得到蛋白溶解液进行超滤浓缩，超滤机上所用超滤膜包的超滤膜的截留分子量为5KD，调节超滤机的参数(MiniPellicon超滤系统、merkmillipore公司)，流速为400ml/min、跨膜压为0.1psi，浓缩10倍，同时，用20mM、pH7.0的磷酸钠缓冲液进行换液。即用恒流泵将第一磷酸盐缓冲液加入到正在浓缩过程中的蛋白溶解液中，并通过恒流泵控制第一磷酸盐缓冲液的流速使蛋白溶解液的体积维持稳定，得到蛋白浓缩液700毫升。
4.第一次纯化
用层析纯化仪(APPSMV100D、利穗(苏州)科技有限公司)对上述蛋白浓缩液进行层析纯化，以二乙基氨基乙基-纤维素(二乙基氨基乙基离子交换介质)作为层析柱填料。上柱前，用20mM、pH7.0的磷酸钠缓冲液平衡，流速10ml/min，平衡体积5CV;平衡结束后，将蛋白浓缩液上柱层析，控制流速8ml/min;上样结束后，用平衡液平衡5CV，流速为10ml/min;用含1mol/L氯化钠的20mM、pH7.0的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱(从0%B到100%B拉梯度洗脱，共10CV)，收集得到粗白蛋白溶液400ml毫升。洗脱后，用2mol/L的氯化钠溶液对层析柱进行再生处理。
5.第二次进行换液
通过超滤机对步骤4中得到粗白蛋白溶液进行超滤浓缩，超滤机上所用超滤膜包的超滤膜的截留分子量为5KD，调节超滤系统的参数，流速为400ml/min、跨膜压为0.1psi，用20mM、pH5.0的柠檬酸钠缓冲液进行换液。得到粗蛋白液600毫升。
6.第二次纯化
用层析纯化仪对上述粗蛋白浓缩液层析纯化，以磺丙基-纤维素(磺丙基离子交换介质)作为层析柱填料。上柱前，用20mM、pH5.0的柠檬酸钠缓冲液平衡，流速6ml/min，平衡体积10CV;平衡结束后，将蛋白浓缩液上柱层析，流速4ml/min，直接收集流出液，得到高纯度的低杂质含量的牛血清白蛋白溶液1000ml毫升。经冷冻干燥后记得到牛血清白蛋白粉。
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