随着分子生物学技术的高速发展,以核酸杂交、核酸扩增及核酸序列分析为代
表的分子诊断和检测技术在诸多领域中日益凸显出至关重要的作用。样本处理为分子诊断实验的“第一步",也是最关键的一步,其获得的核酸质量的优劣将直接影响到下游分子生物学试验的成败。
核酸提取传统方式:
传统的提取方法主要有:酚抽提法、亲和层析柱、密度梯度离心和硅胶柱法。
这些传统提取方法可从不同组织样本中分离出DNA和RNA,但这些技术中包含沉淀和离心等操作步骤,其所需的生物样本量较大,提取步骤较为繁杂、费时费力,得率也不高,难以实现自动化操作,另外,大部分的传统方法中还需要用到有毒化学试剂,对操作人员的健康具有潜在危害,因此,伴随着分子生物学以及材料学的发展,采用磁珠的方法从液相系统中分离纯化核酸的新方法已经崛起。
磁珠法提取核酸的出现:
磁珠是利用高分子材料或者生物分子包被四氧化三铁核心而形成的可以被磁铁吸附的同时纳米或微米小球。用于核酸纯化的磁珠表面功能基团一般为羟基(OH)和羧基(COOH)。
磁珠分离核酸核心技术是固相可逆固定化技术,但磁珠和核酸具体是如果相互作用吸附在一起,目前还不是很清楚,盐桥理论是其中猜想之一。在利用磁珠结合核酸的体系中,由于缓冲液的作用核酸分子(DNA&RNA)会由线性变成球状,暴露出核酸骨架上大量的负电基团与反应体系中的阳离子连接,在磁珠外层负的作用下,形成“阴离子-阳离子-阴离子"的盐桥结构,使核酸分子被特异性地吸附到磁珠表面。而当反应缓冲液被弃除后,加入水性分子,会快速充分水化核酸分子,解除三者之间的离子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被纯化出来。
磁珠法具有其它DNA提取方法不可比拟的优势:
(1)样本需求量低:核酸提取体系可简单放大和缩小,微量的材料即可提到高浓度的核酸;
(2)操作简单快速:整个操作流程基本分为五步(裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱),手动操作可以30-40min完成,无需离心。
(3)全自动化操作:采用核酸提取仪可实现自动化、高通量操作,一键启动,即可实现几十甚至几百个样品的提取,全过程最短9min可实现;
(4)安全无毒无害:试剂不含酚、氯仿等有毒化学试剂,*符合现代化环保理念。