原理:
凝胶电泳的原理比较简单。当一种带电分子放在电场当中时,它们就会以一-定的速度移向适当的电极。带点分子在电场作用下的移动速度,称之为电泳迁移率,它同电场的强度和电泳分子本身携带的静电荷数成正比。也就是说,电场强度越大,电泳分子所携带的静电荷越多,其移动速度也就越快,反之则慢。在哪电泳中,使用无反应活性的琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶作支持介质,从而将电泳分子的对流运动降低到极低,使电泳分子的移动速度与其分子的摩擦系数成反比。已知摩擦系数是分子大小、极性及介质黏度的函数,因此根据分子大小的不同、构型或形状的差异,以及所带净电荷的多寡,便可以通过电泳将核酸或蛋白质分子混合物中的各种成
分彼此分离开来。
凝胶电泳的原理比较简单。当一种带电分子放在电场当中时,它们就会以一定的速度移向适当的电极。带点分子在电场作用下的移动速度,称之为电泳迁移率,它同电场的强度和电泳分子本身携带的静电荷数成正比。也就是说,电场强度越大,电泳分子所携带的静电荷越多,其移动速度也就越快,反之则慢。在哪电泳中,使用无反应活性的琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶作支持介质,从而将电泳分子的对流运动降低到极低,使电泳分子的移动速度与其分子的摩擦系数成反比。已知摩擦系数是分子大小、极性及介质黏度的函数,因此根据分子大小的不同、构型或形状的差异,以及所带净电荷的多寡,便可以通过电泳将核酸或蛋白质分子混合物中的各种成分彼此分离开来。
分类:
一.琼脂凝胶电泳( 分辨DNA范围为0.2~50kb)
二.聚丙烯酰胺凝胶电泳(分辨范围为1~1000kb )
三:脉冲电场凝胶电泳( 分离到高达107bp的DNA大分子)
琼脂糖凝胶电泳是尤为常用的小片段核酸前,用于分离鉴定和纯化DNA或RNA。
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一-种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关。分辨DNA范围0.2~50kb;而要分辨较小分子质量的DNA,则要用聚丙烯酰胺凝胶,其分辨范围为1~1000bp。凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小,浓度越高,孔隙越小,其分辨能力也就越强;反之,浓度越低,孔隙就增大,其分辨能力也就越弱。
实验大致步骤:配胶、EB染色、点样、电泳、成像拍照、胶图分析
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