返回首页 在线留言 联系我们

产品目录

联系方式

首页 > 技术支持 > 凝胶电泳迁移速率的决定因素你知道有哪些么

技术支持

凝胶电泳迁移速率的决定因素你知道有哪些么
更新时间:2019-09-18   点击次数:2452次
    凝胶电泳迁移速率的决定因素你知道有哪些么

  琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:

  1、DNA的分子大小

  线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。

  2、琼脂糖浓度

  一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%,DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。

  3、DNA分子的构象

  DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动快,而开环双链DNA移动慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。

  4、电源电压

  在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段有效分离所加电压不得超过5V/cm。

  5、嵌入染料的存在

  荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15%。

  6、离子强度影响

  电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。

  对于天然的双链DNA,常用的几种电泳缓冲液有TAE[含EDTA(pH8。0)和Tris-乙酸],TBE(Tris-硼酸和EDTA),TPE(Tris-磷酸和EDTA),一般配制成浓缩母液,储于室温。

分享到:

返回列表 | 返回顶部
上一篇 : 康宁(Corning)新上市NK Kit Ⅱ NK细胞培养全套解决方案    下一篇 :  简单分享一下凝胶电泳的原理
网站首页 kaiyun(中国)体育 产品中心 应用案例 技术支持 企业动态 联系我们
红荣微再(上海)生物工程技术有限公司 版权所有 总访问量:886868
地址:上海市闵行区顾戴路2337号维璟中心G幢19C2
GoogleSitemap 技术支持:化工仪器网 ICP备案号:沪ICP备20015702号-1
手机:
15021010459
 

化工仪器网

推荐收藏该企业网站
Baidu
map