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CAR-T细胞冻存袋分享细胞冻存方法
更新时间:2019-05-05   点击次数:3999次
   CAR-T细胞冻存袋分享CAR-T细胞冻存方法,包括以下步骤:

  (1)将培养的CAR-T细胞转移至离心管中,在200-500g条件下,离心5-8min,弃掉上清液;

  (2)将离心后的细胞团先用DPBS重悬,确认细胞团被*打碎,在磁力架上静止2-5分钟,实现细胞跟磁珠的分离;

  (3)用移液管将细胞悬液转移至新的离心管中,重复去磁珠操作两次;

  (4)将清除磁珠后的细胞悬液在200-500g条件下,离心5-8min,弃掉上清液,备用;

  (5)根据需要冻存的细胞总数量,计算冻存介质的体积,将细胞重悬于冻存介质中;

  (6)将细胞分装于冻存管或者冻存袋中,放置于-80℃超低温冰箱中缓慢冷冻8-18小时,或者放置于程序降温仪中按照相应程序降温至-85℃;降温结束后,将细胞冻存管或者冻存袋转移至液氮中长期保存。

  回输需要时,在液氮条件下运送至治疗医院,在37℃条件下快速解冻后,可以直接回输给治疗病人。

  所述步骤5中的冻存介质由氯化钠、二甲基亚砜、葡萄糖、人血白蛋白、低分子葡聚糖和RPMI-1640基础培养基组成,其中氯化钠的质量浓度为0.45-0.9%,二甲基亚砜溶液的体积浓度为5-15%,葡萄糖的质量浓度为5-20%、人血白蛋白的质量浓度为10-50%,低分子葡聚糖的质量浓度为5-20%。

  优选的,所述步骤5中的冻存介质,其中氯化钠的质量浓度为0.9%,二甲基亚砜溶液的体积浓度为10-15%,葡萄糖的质量浓度为5-10%、人血白蛋白的质量浓度为10-30%,低分子葡聚糖的质量浓度为5-10%。

  进一步优选的,所述步骤5中的冻存介质,其中氯化钠的质量浓度为0.9%,二甲基亚砜溶液的体积浓度为10%,葡萄糖的质量浓度为5%,人血白蛋白的质量浓度为10%,低分子葡聚糖的质量浓度为5%。

  所述步骤5中CAR-T细胞的冻存密度为1×106个/ml-500×106个/ml。

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