1、培养器皿的清洗 培养器皿清洗后不仅要求透明、无污迹,而且不能残留任何物质。某些化学物质仅残留百万分之一毫克,就会对细胞产生毒性作用。因此清洗质量的好坏直接影响到细胞培养成功与否,必须严格按照清洗的程序进行,以保证达到清洗的目的。一般玻璃器皿清洗的程序包括:浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。
(1) 浸泡
初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡,以使附着物软化或溶解。新的玻璃器皿使用前应先用自来水简单刷洗,然后用5%稀盐酸溶液浸泡过夜,以中和其中的碱性物质。用过的玻璃器皿往往粘有大量蛋白质,干燥后不易刷洗掉,故用后立即浸入清水中刷洗。
(2) 刷洗
将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂(不用含沙粒的洗衣粉)水中,用软毛刷反复刷洗,注意不留死角,洗后晾干备浸酸。
(3) 浸酸
刷洗不掉的微量杂质经过浓硫酸和重铬酸钾清洁液的强氧化作用后,可被除掉,而且对玻璃器皿无腐蚀作用,去污能力很强,是清洗过程中关键的一环。清洁液是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成。浸泡时,器皿要充满清洁液,勿留气泡。浸泡时间不应少于6小时,一般应浸泡过夜。
(4)冲洗
刷洗和浸酸后都必须用水充分冲洗,使之不留任何残迹。冲洗宜用洗涤装置,亦可用手工操作,每瓶都得用水灌满,倒掉,重复十五次以上,后再用蒸馏水漂洗2~3次,晾干备用。
2、橡胶制品的清洗 新购置的橡胶制品带有大量滑石粉应先用自来水冲洗干净后,再作常规清洗处理。常规处理方法是:每次使用后的橡胶制品都要置入水中浸泡,以便集中处理和避免附着物干涸,然后用2%NaOH液煮沸10~20分钟,以除掉培养中的蛋白质。自来水冲洗后,再用1%稀盐酸浸泡30分钟,后用自来水和蒸馏水各冲洗2~3次,晾干备用。用过的胶塞的清洗方法基本同清洗玻璃器皿,但胶塞刷洗的重点部位是胶塞使用面,逐个刷洗。