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技术支持

人间充质干细胞流式检测方案
更新时间:2018-01-02   点击次数:7346次

人间充质干细胞流式抗体鉴定流程

 

准备细胞

抗体染色

上机检测

 

人间充质干细胞流式鉴定操作步骤

 

1、准备细胞:取培养的细胞离心(300 g/5min),弃去上清, 加入一定量PBS洗涤一次,弃去上清,弹散细胞,细胞重悬到5×106~10×106之间

 

2、MSC人间充质干细胞流式鉴定配色方案

取100 ml的细胞于EP管或流式管内,分三管染色

*管 阳性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APCAnti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml

第二管 阴性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml

第三管同型对照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 mlMouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml,Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml

 

配色依据:细胞治疗协会间充质和组织干细胞委员会2006年提出了MSC鉴定的zui低标准,关于细胞表型的要求是表达CD90, CD105和CD73不表达CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR;阳性指标都需要染色,阴性指标一般选择2-3个指标,因为是做细胞表型鉴定,所以要配齐同型对照。

 

3、加入相应的抗体后混匀,建议弹管子,尽量不用枪头直接吹打,室温避光孵育15 min,染色过程中再混匀一次

4、染色完成后加入1 ml的PBS洗涤细胞,离心300 g/5min

5、弃去上清,弹散细胞,加入500 ml PBS重悬,上机检测。

 

注意:1、同型对照是根据染色抗体的用量来计算的,所以每种同型对照可能加入量可能不一样(具体可看后文同型对照章节的介绍)。

      2、先上机检测同型对照管,各检测通道以这一管的信号设为阴性,在上机检测抗体染色管。

      3、zui后结果的显示用峰图来表示,每种抗体的检测结果都与对应的同型对照染色结果叠加展示( overlay )。

 

MSC人间充质干细胞流式鉴定结果

 

 

注意:CD90表达量非常高,所以建议用FITC荧光染料,FITC/PE-Cy7/APC这三种荧光染料之间几乎没有补偿,所以这三种染料一起染色不需调节补偿,如果是做脐带干细胞的鉴定,CD105抗体选择SN6克隆号,其他克隆号染色结果不好(某些克隆号染不上)。

 

MSC人间充质干细胞流式配色抗体产品

 

品牌

货号

产品名称

规格

价格

BioGems

03011-50

  Anti-Human CD90 (Thy-1) FITC

25 test/100 tests

25 test

1540元

BioGems

07111-77

  Anti-Human CD45 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

1680元

BioGems

17111-80

  Anti-Human CD105 (Endoglin) APC

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

74111-50

  Anti-Human HLA-DR FITC

25 test/100 tests

25 test

1400元

BioGems

06411-77

  Anti-Human CD34 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

05811-80

  Anti-Human CD73 APC

25 test/100 tests

25 test

1960元

 

 

同型对照

总价

10920元

BioGems

44212-50

  Mouse IgG1 K Isotype Control  FITC

100 mg

1120元

BioGems

44212-77

  Mouse IgG1 Isotype Control  PE-Cy7

100 mg 

1890元

BioGems

44212-80

  Mouse IgG1 Isotype Control APC

100 mg

1750元

 

 

MSC人间充质干细胞流式鉴定配色方案由Biogems提供。

 

上游产品 人间充质干细胞无血清培养基

 

HY STEMCELL CCGmHuMTM 人间充质干细胞无血清培养基成分确定、无血清、无异源物,无需铺板胶的*培养基。适用脐带或脂肪来源的人间充质干细胞的原代培养扩增。培养的hMSC可传多代。

 

 

背景知识

 

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)来源于中胚层,是一种类似成纤维细胞样形态,贴壁生长,表达CD105、CD73、CD90,不表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19的细胞;它可以从骨髓、脂肪、脐带华通氏胶、胎盘脐带血、牙髓绒毛膜等多种组织中被分离出来;它是具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞,能体外培养并在特定条件下分化为神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。MSCs在细胞治疗中有广泛的用途,包括组织工程、再生医学和被用作基因治疗的载体

 

 

 

MSC人间充质干细胞流式产品代理,华雅人间充质干细胞无血清培养基销售欢迎您致电 华雅再生医学旗舰公司:红荣微再(上海)生物工程技术有限公司 

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