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LONZA支原体检测试剂盒的操作步骤说明
更新时间:2017-11-06   点击次数:3970次
   LONZA支原体检测试剂盒操作步骤:

  贴壁细胞:

  1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中,接种密度为1-2×104。同时,接种正常

  无支原体感染的同种细胞,作为阴性对照。

  2.5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min,

  3.吸去固定液,晾干。

  4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部

  被检细胞),37℃避光放置15-20min或室温静置20~30min。

  5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml灭菌超纯水洗涤三次,直接风干。风干后加

  入一滴封片液,并以盖玻片覆盖。

  6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状

  荧光小点。

  悬浮细胞:

  1.收集需检测的细胞,1500rpm,5min。

  2.将收集的细胞涂片于载玻片上,再加1ml的固定液,静置20min。

  3.吸去固定液,晾干。

  4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部

  被检细胞),37℃避光放置15~20min或室温静置20~30min。

  5.吸去Hoechst 33258工作液,用无菌水洗涤玻片3次,直接风干。风干后加入一滴

  封固液,并以盖玻片覆盖。

  6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状

  荧光小点。

  结果判断(参考):

  阴性:仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。

  阳性:除细胞外,细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。

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