流式抗体搭配流式荧光素主要有2个原则：

　　*，每个通道只能选择1种荧光素。

　　第二，各个通道之间的荧光素可以随意搭配，因此需要注意：

　　1、流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了Alexa Fluro488就不能选FITC ，或者选择了FITC就不能选择AlexaFluro488。Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素，但是我们搭配的时候只能选择其中1个。

　　2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )+P E(F L 2)+PerCP(FL3)+APC(FL4)，这个搭配组合可以更改成Alex Fluro(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+Alex Fluro(FL4)，或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度。

　　流式抗体使用注意事项：

　　(1)建议实验细胞的数量和抗体的比例要适当。细胞过量或抗体过量都可能使实验结果受影响，因此需要优化试验条件。注：不同的流式技术对抗体的需求量有较大差异，例如传统流式细胞术(采用鞘液流系统)需要1×106个细胞为起始上样量，抗体用量为10μl，而微流式细胞术则只需5×105个细胞，抗体用量减少到5μl。

　　(2)直标的流式抗体应该4℃避光保存，不要冷冻。尽量选择经实验验证的流式抗体，以保证实验结果。